elisa试剂盒检测说明

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、试剂

(1)5%与2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制；

(2)牛血清白蛋白(BSA)缓冲液
：用0.05mol/LpH7.4PBS配制。含0.01mol/LEDTA、0.1%硫柳汞
、0.05%Tween20及4%BSA
；

(3)HRP-SPA用改良过碘酸钠法将SPA与辣根过氧化物酶(HRP)制成结合物


，最适工作浓度以方阵法滴定；

(4)热聚合人IgG：人IgG10mg/ml
，63℃加热20min制成
。

2、把持步伐

(1)用PBS稀释SPA成5Ps/ml


，包被聚苯乙烯反应板微孔

，每孔0.1ml( 比力孔不包被)




，置4℃ 过夜后洗涤3次备用
；

(2)待测血清0.05ml加PBS0.15ml和5%PEG0.2ml混匀，4℃ 过夜后1600r/min离心20min

，弃上清

，沉淀用2.5%PEG洗2次
，加入PBS0.2ml和BSA缓冲液0.2ml






，混匀，置37℃水浴30min
，摆荡
，使彻底溶解

；

(3)将已溶解的待测血清沉淀物加至上述包被孔和比力孔中
，置37℃60min


，洗3次；各孔加底物溶液(OPD—H202)0.1ml，37℃20min使呈色

。每孔加2mol/LH2S041滴终止反应
。置酶标仪492nm测各孔吸光值
；

(4) 标准曲线制备


：取正常人血清0.2ml，加热聚合人IsC(120ug/ml)0.2ml


，再加PBS0.4ml和5%PEG0.8ml
，置4℃ 过夜


。同时做不加热聚合人耽的正常血清比力
，以排除血清中干扰因素
。沉淀清洗同标本把持。用稀释的BSA缓冲液(加等量0.01mol/LpH7.4PBS)1.6ml溶解并稀释成120


、60、30
、15、7.5ug/ml
，与待测血清同法把持，制成工作标准曲线

；

(5)结果判断：从待测血清吸光度值查标准曲线，即可换算成相当于热聚合人IgG的CIC含量(ug/ml)。以高于正常比力X+2S，即大于28.4ug/ml为阳性






。

3、注意事项

(1)热聚合人IgC应分装贮存于-20℃
，不宜反复冻融，否则易解聚；

(2)PEG的浓度影响CIC沉淀量


，须严格配制。