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接近peprotech细胞因子处理方法
编辑:       时间: 2012-11-07       https:// www.freedomyiqi.com

接近peprotech细胞因子所需仪器

1  、流式上样管及细胞培养皿或板

2 、25%CO2,37℃孵箱

3   、混匀振荡器

4   、离心机

5   、加样器  、Tips

6、流式细胞仪

全血 :使用肝素钠抗凝的真空采血管采血    ,不易采用肝素锂  、EDTA和ACD抗凝剂 ,血样在8小时内分析,超过8小时会导致活性的损失,一般细胞因子阳性细胞会减少5% 。如不能在8小时之内检测   ,应将真空采血管水平室温放置。

自身血浆中外周血单个核细胞(PBMCs) :使用肝素钠抗凝的采血后   ,分离PBMCs,24小时内分析。

组织培养基中的外周血单个核细胞(PBMCs):用Ficoll分离PBMCs,将细胞重悬于含10%热灭活胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基中,调节细胞浓度为2×106细胞/ml。

调节细胞浓度2×106细胞/mL于新鲜培养基中 。

冰冻全血与PBMCs:使用1×红细胞裂解液处理活化的外周血或者PBMCs,用PBS漂洗 ,并用含1%的BSA及10%的DMSO的PBS重悬,-70℃冻存 。溶化后细胞置于染色管中,加上2~3mL的洗液 ,离心5分钟后   ,用破膜剂对细胞进行破膜和染色。

 

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