ELISA试剂盒试验时，注意事项如下




：
　　
　　1.正式试验时
，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件
，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性


。有时本底较高，说明有非特异性反应

，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭

。
　　
　　2.在ELISA中


，进行各项实验条件的选择是很重要的






，其中包括:
　　
　　(1)固相载体的选择
：许多物质可作为固相载体
，如聚氯乙烯




、聚苯乙烯
、聚丙酰胺和纤维素等


。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板
。不管何种载体




，在使用前均可进行筛选
：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性
，据此判明其吸附性能是否良好。
　　
　　(2)包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时


，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度
，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时


。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定

：即用不同的蛋白质浓度(0.1
、1.0和10μg／ml等)进行包被后


，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml

。
　　
　　(3)酶标记抗体工作浓度的选择
：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)
。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物
、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度

。
　　
　　(4)酶的底物及供氢体的选择
：对供氢体的选择要求是价廉

、安全
、有明显地显色反应


，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用


，应注意防护


。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体
，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体
。底物作用一段时间后



，应加入强酸或强碱以终止反应


。通常底物作用时间


，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制




，尤其是H2O2在临用前加入。