DIY夹心法ELISA常见技术指南


：

1、选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对




；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体；最好从同一家公司选择抗体对


。
2

、ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定



。同时
，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作







。
3

、标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书

，注意每批的细节



。在使用细胞因子前
，瞬时离心试剂瓶



，尽可能多地收回其中的细胞因子
。根据每批说明书中的细节




，将冻干的细胞因子复溶

。
4、一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml
。可利用标准的ELISA操作流程
、放大试剂盒
、第三类试剂
、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度
。
5

、为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。
6

、若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性
。
7、当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig.

ELISA试剂盒