本ELISA试剂盒只能用于科学研究



，不得用于医学诊断

检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)

。往预先包被人脊髓灰质炎(PV)纯化抗原的包被微孔中

，依次加入标本
、标准品、HRP标记的检测抗体






，经过温育并彻底洗涤
。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色
，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人脊髓灰质炎IgG(PV IgG)呈正相关
。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)
，判断样品中是否含有人脊髓灰质炎IgG(PV IgG)。
样品收集





、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管

，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆


：EDTA

、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆



：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存
：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装
，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.     酶标仪(450nm)
2.     高精度加样器及枪头





：0.5-10uL
、2-20uL、20-200uL
、200-1000uL
3.     37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶
，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中
，密封(低温干燥)保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间




、加液量及顺序进行温育操作




。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀
。
试剂盒组成

名称 96孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无
阴性对照 0.5mL  0.5mL  无
阳性对照 0.5mL  0.5mL  无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL 无
底物B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2张 2张 无
说明书 1份 1份 无
自封袋 1个 1个 无
 
试剂的准备
 20×洗涤缓冲液的稀释





：蒸馏水按1






：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板

：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL





，浸泡1min


，洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条
，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置阴

、阳性对照孔和样本孔，阴
、阳性对照孔中加入阴性对照



、阳性对照各50μL
；
3. 待测样本孔加待测样本50μL



；
4. 随后阴



、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL


，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min

。
5. 弃去液体


，吸水纸上拍干
，每孔加满洗涤液

，静置1min

，甩去洗涤液
，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A
、B各50μL，37℃避光孵育15min
。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内

，在450nm波长处测定各孔的OD值
。
结果判断
 1. 试验有效性


：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；
                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2. 临界值(Cut off)计算
：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品OD值＜临界值(Cut off)，样品为阴性
4. 阳性判断
：样品OD值＞临界值(Cut off)
，样品为阳性
试剂盒性能
1.  准确性

：阳性对照孔OD值平均值≥1.00
；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效


。
2.  特异性
：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.  重复性
：板内、板间变异系数均小于15%
。
4.  贮藏：2-8℃
，避光防潮保存



。
5.  有效期
：6个月