在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：

（1）　固相载体的选择

：许多物质可作为固相载体
，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等

。其形式可以是凹孔平板、试管

、珠粒等

。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被
，在同一实验条件下进行反应

，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗体（或抗原）的选择
：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时



，要求纯度要好
，吸附时一般要求PH在9





。0～9

。6之间。吸附温度
，时间及其蛋白量也有一定影响
，一般多采用4℃ 18～24小时
。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0


。1
、1




。0和10μg/ml等）进行包被后





，在其它试验条件相同时




，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度
。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml
。

（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）
。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度




。

（4）　酶的底物及供氢体的选择
：对供氢体的选择要求是价廉、安全

、有明显地显色反应，而本身无色




。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用
，应注意防护
。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体



，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体


。底物作用一段时间后
，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间

，以10-30分钟为宜
。底物使用液必须新鲜配制


，尤其是H2O2在临用前加入
。