Elisa试剂盒操作方法一

用于检测未知抗原的双抗体夹心法
　　
    1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml








。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜

。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次

，每次3分钟

。（简称洗涤


，下同）

。 　　

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔




，阴性对照孔及阳性对照孔）。 　　

3.　加酶标抗体
：于各反应孔中
，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml
。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤




。 　　

4.　加底物液显色

：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml


，37℃ 10～30分钟

。 　　
5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 　　

6.　结果判定：可于白色背景上


，直接用肉眼观察结果

：反应孔内颜色越深

，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅
，依据所呈颜色的深浅


，以“+”

、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上

，于450nm（若以ABTS显色
，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值

，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。