人（Human）MICA抗体（MICA）ELISA试剂盒使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先
包被抗原的包被微孔中 ，依次加入标本 、HRP标记的检测抗原 ，经过
温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化
成蓝色 ，并在酸的作用下转化成最终的黄色 。用酶标仪在450nm波长
下测定吸光度（OD 值） ，与CUT OFF值相比较 ，从而判定标本中人MICA
抗体（MICA）的存在与否 。
样品收集 、处理及保存方法
1 。 血清：使用不含热原和内毒素的试管 ，操作过程中避免任何细胞
刺激，收集血液后 ，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地
分离 。
2。 血浆 ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝 。3000 转离心30 分钟取上清。
3。 细胞上清液 ：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物 。
4。 组织匀浆 ：将组织加入适量生理盐水捣碎 。3000 转离心10 分钟
取上清 。
5 。 保存 ：如果样本收集后不及时检测 ，请按一次用量分装，冻存于
-20℃，避免反复冻融 ，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1。 酶标仪（450nm）
2 。 高精度加样器及枪头 ：0 。5-10uL 、2-20uL 、20-200uL、200-1000uL
3 。 37℃恒温箱
操作注意事项
1。 试剂盒保存在2-8℃ ，使用前室温平衡20 分钟 。从冰箱取出的
浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解
后再使用 。
2 。 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存 。
3。 预处理后的样本无需稀释 ，直接取50μL 加样即可 。4 。 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作 。
5。 所有液体组分使用前充分摇匀 。
试剂盒组成
名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无
阴性对照0 。5mL 0 。5mL 无
阳性对照0 。5mL 0 。5mL 无
检测抗原-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL 无
底物B 6mL 3mL 无
终止液6mL 3mL 无
封板膜2 张2 张无
说明书1 份1 份无
自封袋1 个1 个无
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1 ：20 稀释，即1 份的20×洗涤缓
冲液加19 份的蒸馏水 。
洗板方法
1 。 手工洗板：甩尽孔内液体 ，每孔加满洗涤液 ，静置1min 后甩尽
孔内液体 ，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次 。
2 。 自动洗板机 ：每孔注入洗液350μL，浸泡1min ，洗板5 次 。
操作步骤
1。 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封
袋密封放回4℃ 。
2 。 设置阴 、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、
阳性对照各50μL ；
3 。 待测样本孔加待测样本50μL；
4 。 随后阴 、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）
标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温
箱温育60min 。
5。 弃去液体 ，吸水纸上拍干 ，每孔加满洗涤液 ，静置1min ，甩去
洗涤液 ，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板） 。
6 。 每孔加入底物A 、B 各50μL ，37℃避光孵育15min 。
7 。 每孔加入终止液50μL ，15min 内 ，在450nm 波长处测定各孔的OD 值 。
结果判断
1 。 试验有效性 ：阳性对照孔OD 值平均值≥1。00 ；
阴性对照孔OD 值平均值≤0 。15 。
2 。 临界值（Cut off）计算 ：临界值=阴性对照孔平均值+0 。15
3 。 阴性判断：样品OD 值＜临界值（Cut off） ，样品为阴性
4。 阳性判断 ：样品OD 值＞临界值（Cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1。 准确性 ：阳性对照孔OD 值平均值≥1 。00 ；阴性对照孔OD 值平均
值≤0。15，说明试验结果有效 。
2 。 特异性 ：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3 。 重复性：板内 、板间变异系数均小于15% 。
4 。 贮藏 ：2-8℃ ，避光防潮保存 。
5 。 有效期：6 个月
免责声明
1。 试剂盒仅供研究使用 ，不得用于临床实验或人体实验 ，否则所
产生的一切后果 ，由实验者承担 ，本公司概不负责 。
2 。 严格按照说明书操作 ，实验者违反说明书操作 ，后果由实验者
承担 。
